骨髓穿刺（cì）抽吸技術  

骨髓穿刺抽吸技術的早期發展主要集中在人類醫學（xué）領域，隨後逐漸應用於動物研（yán）究。最初的（de）技術較為簡單，主（zhǔ）要用於獲取（qǔ）骨髓樣本以進行血液學和病理學分析。隨著研究需求的（de）增加，骨髓穿刺（cì）抽吸的技術逐漸得到了改進和優化，設備改（gǎi）進方麵引入了專用的骨髓穿刺針（zhēn），這些穿（chuān）刺針具備更好的設計可以減少組織損傷和提高（gāo）樣本質量，以及在操作過程（chéng）中引入嚴格的（de）無菌技術以減少感染的風險。

骨髓穿刺技（jì）術不僅在醫學研究中得到廣（guǎng）泛應用還（hái）擴展（zhǎn）到多個領域。藥物（wù）研發，評估（gū）新藥對骨（gǔ）髓的影響，尤其是抗癌藥和免疫抑製藥物的研究中；毒理學研究中，同樣需要研究有毒物（wù）質對（duì）骨髓的影響；此外（wài），基因（yīn）治療，通過獲取骨髓細胞進行基因組研究和基因編輯（jí）實驗等都需要進行骨髓穿刺。本文將介紹實驗犬的骨髓穿刺抽吸技術。

采集部位

對於犬，骨（gǔ）髓樣本通（tōng）常從股骨轉子窩、肱骨近端或髂骨翼采集，其他部（bù）位包括胸骨、肋骨。如果骨盆和股骨區域含有豐富的（de）脂肪組織，采集（jí）則會變得更具挑戰（zhàn）性。下文主要講述犬肱骨近（jìn）端骨（gǔ）髓采集的操作程序。

肱骨近端骨髓采集（jí）

材料和設備（bèi）

○ 無菌手套

○ 電動剪毛（máo）器和清潔溶液

○ 局部麻醉藥（如利多卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四乙酸（suān）溶液（EDTA約2 mL）的培養皿

○ 玻璃顯微鏡（jìng）載玻片

○ 顯微血細胞比容毛細血管（圖A），有毛（máo）細血管球

○ 11號手術刀片

○ 無菌（jun1）紗布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G帶針芯的骨髓（suǐ）針（圖（tú）B和C）

A：骨髓穿（chuān）刺所需的材料和設備

B：帶蓋和針芯的穿刺針

C：已移（yí）除蓋和針芯（xīn）的穿刺針

操作步驟

1、在進行深度鎮靜（jìng）或全身麻醉後，動物側臥位（wèi），修剪采（cǎi）集部位的毛發，可以在（zài）采集部位皮下注射局部麻醉劑（如利多卡因、布比卡因），采集部位無菌清洗。如圖（tú）1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發已剔除。

2、打（dǎ）開並佩戴無菌手套。助理輔助（zhù）將穿（chuān）刺針、注射器和手術刀片打開並（bìng）放入無菌區域，或將這些物品以無（wú）菌的方式遞給術者。使（shǐ）用10或12ml的注射（shè）器，在保持（chí）無菌（jun1）的情況下（xià），抽取約（yuē）1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖1B：從培養皿中抽取EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌區域（yù）內。移除穿刺針的蓋子和針芯，通過順時針旋轉確保（bǎo）針（zhēn）頭的防護裝置牢固地連接在針頭的基（jī）部。將含（hán）有EDTA的（de）注射器連接到針頭（tóu）的頂部並旋緊。通過將EDTA噴回培（péi）養皿來灌注針頭，留下約0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注時保持在培養皿上方，不要讓無（wú）菌（jun1）針頭的尖端接觸培養皿，然後將注（zhù）射器從針（zhēn）頭上移除，置（zhì）於無菌（jun1）區域內。重新裝上針芯和蓋子。注：在大型犬中（zhōng），可（kě）以移除針頭防護裝置，以方（fāng）便進入髓腔。如（rú）圖1C。

圖1C：用EDTA溶（róng）液灌注穿刺針

4、觸摸並確定肱骨近端外側（cè）的平坦（tǎn）區域，位於大結節的遠端。確定肩胛骨和肱骨之間的（de）肩關節，以確（què）保不會誤采到該區域。在平（píng）坦區域正上方的皮膚上切開一個小口。如圖1D。

圖1D：在肱骨近（jìn）端外側的平坦區（qū）域切開一個小口

5、牽拉皮膚，將針頭“彈入”切口，確保（bǎo）針頭已穿透深層皮下組織。重新確認肱骨近端外側（cè）的平坦（tǎn）區域，位於大結節的（de）遠端。將針（zhēn）尖直接放在骨頭上，垂直於平麵。以順時針和逆（nì）時針旋轉的（de）方式適度施加壓力，直至針頭穿透近端骨皮質。穿透（tòu）皮質後，減（jiǎn）小角度，使（shǐ）針頭朝向肘部，平行於髓腔（qiāng）。繼續扭轉，直到（dào）針完全嵌入骨內（nèi）。如圖1E。

圖1E：穿刺針彈入切口

6、移除蓋子和針芯，並（bìng）迅速連接含有EDTA的注射（shè）器。抽吸至可見紅骨髓（suǐ）（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排（pái）出到培養（yǎng）皿。如（rú）圖1F。

圖1F：將骨髓吸入裝有EDTA的（de）注射器

7、骨髓包含在白色的針狀物（wù）中，表明（míng）穿刺成功。使用毛細管或帶有毛（máo）細管球或移液管球的巴斯（sī）德移液管取（qǔ）出並排出這些顆粒，用於血塗片製備。每片至（zhì）少需要1個針狀物；然而，建議每張載玻片至少（shǎo）有3 ~ 5個較大的針狀（zhuàng）物（wù），以進行充分評估。任何剩餘的骨髓內（nèi）容物（wù）都可以收集到EDTA管中，並與載玻片一起送往實驗室。如圖1G。

圖1G：使用巴斯德吸管取出顆粒以製備血（xuè）塗（tú）片（piàn）

8、在動物恢複後給與鎮痛藥物，並根據需要（yào）繼續使用。

潛在（zài）的不良反應、緩解（jiě）措施或治療方法

1、采樣部位感染，但（dàn）這種（zhǒng）情（qíng）況很少（shǎo）見

2、對軟組織（zhī）如神經、肌肉（ròu）和關節表麵的創傷

3、采樣部位出（chū）血

4、術後疼痛

緩解措施

○ 密切注意無菌技術（shù）

○ 仔細辨別解剖標誌，準備骨（gǔ）骼/骨標本以正確找到解剖標誌，避免對（duì）周圍組（zǔ）織造成意（yì）外創傷

○ 對采樣部位施加直接壓力（lì），髓（suǐ）內出血不會引（yǐn）起大的（de）問題，因為血液會迅速被吸（xī）收

○ 術後（hòu）疼痛通常是短暫的，鎮痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥（yào）通（tōng）常是足夠的，但如果需要也可以在術（shù）後使用

小（xiǎo）結

為了提高骨髓穿刺抽吸的成功率和樣本質量，必須製定全麵的（de）標準操作程序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管（guǎn）理（lǐ）、穿刺操作及樣本（běn）處理等各個環（huán）節，並對實（shí）驗人員進行係統且廣泛的培訓。此外，實驗研究人員應持續優化和改（gǎi）進技術，精細化操作流（liú）程，提升效率與準（zhǔn）確性，從而為生物醫學研（yán）究提供高質量的樣本和可靠的數據（jù）支持（chí）。